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Premix PrimeSTAR HS 使用说明书

2×PCR Solution

Premix PrimeSTAR® HS

使 用 说 明 书

Takara Code : DR040A 包 装 量: 500 μl×5支。

50 μl的PCR反应体系时100次量,每次使用25 μl。

制品说明

本制品是PCR反应用的2倍浓度的Premix制品,内含DNA Polymerase、Buffer、dNTP Mixture等。DNA Polymerase使用了Takara独自开发的兼具高保真性和高扩增效率的PrimeSTAR® HS DNA聚合酶。使用本制品时,只需在制品溶液中加入模板和引物便可以进行PCR反应,大大简化了操作过程,减少了PCR操作过程中的污染。PrimeSTAR® HS DNA聚合酶具有极强的3’→5’Exonuclease活性,显示出超群的校正功能,同时还具有优于Taq DNA Polymerase的高扩增效率,其扩增得到的PCR产物几乎都为平滑末端,经磷酸化后可直接克隆于平滑末端的载体中。

Premix

溶液组成 PrimeSTAR® HS DNA聚合酶 1.25 U/25 μl dNTP Mixture 2×conc.;各0.4 mM PrimeSTAR® Buffer 2×conc.;2 mM Mg2+

保存温度:

-20℃。反复冻融活性可能降低,请在第一次融解后轻轻混匀,然后分装至PCR反应管中(50 μl反应时,每管分装25 μl)后-20℃保存,以避免多次反复冻融。

用 途

高保真

PCR扩增DNA片段。 PCR反应性能

1) 以λ DNA为模板可以很好地扩增8、10、12、15 kb的DNA

片段。

2) 以人基因组DNA为模板,可以很好地扩增0.5、1、2、4、6、

8 kb的DNA片段。 反应条件

1.

按下列组份配制PCR反应液。 Premix PrimeSTAR® HS

25 μl 模板DNA* <200 ng 引物 1(20 μM) 0.2-0.3 μM(final conc.) 引物 2(20 μM) 0.2-0.3 μM (final conc.)

灭菌蒸馏水 up to 50 μl

Premix PrimeSTAR HS 使用说明书

人基因组DNA 5 ng~200 ng(<200 ng)大肠杆菌基因组DNA 100 pg~100 ng λ DNA 10 pg~10 ng 质粒DNA 10 pg~1 ng cDNA Library 1~200 ng 2.

PCR反应条件。 98℃ 10 sec 55℃ 5 sec或

72℃ 1 min/kb Or

98℃ 10 sec 68℃ 1 min/kb

30 Cycles

注)本酶具有高退火效率,所以在设定PCR条件时可以缩短退

火时间。 应用例

1.

以人基因组DNA为模板进行PCR扩增。 模 板: 人基因组DNA 50 ng(50 μl反应体系)。 PCR仪: TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice®。 PCR条件:

【0.5~6 kb时进行3 Step PCR】 98℃ 10 sec 60℃ 5 Cycles

72℃

Premix PrimeSTAR HS 使用说明书

1

Premix PrimeSTAR HS 使用说明书

min/kb 【7.5~8.5 kb时进行2 Step PCR】 98℃ 10 sec

68℃ 8 30 Cycles

2.

以大肠杆菌基因组DNA为模板进行PCR扩增。 模 板: 大肠杆菌基因组DNA 100 pg(50 μl反应体系)。 PCR仪: TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice®。 PCR条件:3 Step PCR

98℃ 10 sec 60℃ 5 Cycles 72℃ 1 min/kb

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